1 制种时间
制种时间的确定很重要，一般栽培种菌龄在适温下45d为最好。根据这一规律，应切实安排好制种时间。可采取倒推法计算时间。如：9月1日播种，那么制种时间应该在7月15日左右。
2 制种原材料
制种原材料分主料和辅料。小麦为主料，一瓶菌种应准备250g小麦，小麦要求无霉粒，籽粒饱满，碎粒少，隔年陈麦为好。辅料分为填充料和封口料。辅料可用种过草菇的牛粪、发酵后粉碎好的棉籽壳、发酵后的牛粪、种过平菇、金针菇的菌糠等。辅料具有缓解湿度，缓冲酸碱度抑制杂菌生长发生的作用。同时还应准备一定量的石灰、透玻璃瓶、以及棉塞等。玻璃瓶代替菌种瓶可减少开支，可用500mL医用盐水瓶代替，也可用500g装白色酒瓶。
3 小麦预湿
①浸泡法。先称好小麦的重量，按小麦重量的1%加入石灰粉放入水中充分搅拌，水淹没麦粒为准，根据麦粒情况决定浸泡时间长短：如果气温高，浸泡时间相应较短；温度低，浸泡时间相应较长。无论时间长短，都应达到麦粒中心无硬心，外表不溃烂。
②预煮法。铁锅加水直接把麦粒倒入锅中，水淹没麦粒。生火加热。达到熟而不烂为标准。
4 晾晒
经过浸泡，或预煮后的小麦洗净所含石灰，放在经过硬化后的干净地面上，摊开晾晒。除去多余水分。含水量达到55%即可使用。根据笔者经验，其测算方法是浸泡或预煮前称重小麦，晾晒后再次称重，湿麦增重50%即达含水标准。
5 拌入辅料
晾晒好的麦粒均匀掺入麦粒干重12%的辅料，2%石膏粉。辅料用前应充分晒干粉碎。
6 装瓶
掺入辅料后的麦粒应尽快装瓶防止发酵起热。装瓶前瓶子应清洗干净，去掉瓶子上的标签等杂物。装瓶时瓶肩应留空隙，不可装满。空隙处装入填充辅料。辅料应拌湿装入，湿度达70%左右，湿度越高，原种接入时萌发越快。
7 灭菌
菌种瓶装满后应塞上棉塞，棉塞不可太紧也不可太松。太紧透气较差，太松容易掉，灭菌可用小型高压锅，也可采用柴油桶，采用常压灭菌。采用高压灭菌时，压力达1.5MPa，1.5~2h即可。常压灭菌时，100℃，36h然后再闷一天即可。
8 接种
接种可用接种箱，也可用塑料筒制作简易接种箱，接种前房间应打扫干净，灭菌杀虫。接种用的工具有：酒精灯、自制接种钩、75%酒精棉球以及消毒药品。接种前应把上述工具及待接麦粒瓶放入接种箱。接种时，麦粒瓶温不能高于28℃，把原种瓶用75%酒精棉球擦拭后放入接种箱。然后按1m3空间倒入甲醛10mL，高锰酸钾5g放入容器内发生反应后，扎紧接种箱口。也可用烟熏剂一包点燃后消毒灭菌，30min（分钟）后即可接种。接种时操作人员手臂用酒精棉球擦拭，所用钩子除用酒精棉球擦拭外还应在酒精灯火焰上灼烧，待凉后，拔掉原种瓶上棉塞及待接麦粒瓶上棉塞，快速将菌种钩入麦粒瓶。按一瓶原种接100瓶麦粒瓶的用量，掌握用种量。
9 菌种培养
菌种培养的最适宜温度在24℃上下，不宜超过1℃。长期低温菌种生长慢，耽误播种期。如果长期高于29℃菌种活力降低，易衰老，播种后吃料慢，出菇迟，小菇居多，蘑菇品质差，产量低。培养室应选择远离家禽家畜的地方，并且要干净通风，保持黑暗。用前应打扫干净，彻底灭菌灭虫。根据以上原则，培养菌种时，可选择地下室、山洞、空调房等。比如可以在灭菌杀虫过的房内，用砖垒几个池子，上覆塑料膜，池内放入菌种，然后用水泵从地下井内抽入凉水，水至平肩处。由于地下水温在4℃左右，所以降温很快。根据水温情况几天换水几次，较好的控制了菌种培养温度。空调房，现在农村空调已经很普遍，利用空调降温已成为现实，此法简单好控制，缺点是成本稍高。
10 菌种检查
培养的菌种应定期检查，检查的方法是一看：优质的双孢蘑菇菌种呈银灰色，生长速度稳定。凡是生长过快过慢颜色呈绿、黄、红、黑颜色的菌种都不合格，及早检出。二嗅：优质菌种有浓郁的蘑菇气味，凡是含有酸臭味的均不合格应检出销毁。检查中如发现菌丝稀疏，瓶壁有缺刻露出麦粒的菌种十有八九是受到虫害，应检出销毁，同时菌种室应喷药杀虫一次。
