真姬菇的接种发菌：料袋冷却后，将部分料袋密排至接种桌，其余装入周转箱，或码在接种桌周围；将种源用75%酒精擦洗后，排在接种桌一另一端放置净化机，开机10分钟后，即可进行播种，袋、接入菌种等均常规操作，一般每瓶种源可接30袋，或接两头出的菌袋15个左右；也可采用常规接种箱进行该操作；播种操作注意项如下：
①检查料袋温度。必须降至28℃以下，如在高温季节生产菌袋，则降至常温水平即可，料袋起始温度过高的结果必然是影响菌种活力，或者使菌种抗性降低，后期发病严重，甚至烧死菌种。
②严格检查种源。对于自制种源，确认合格后，可使用75%酒精进行表面消毒，直接进行播种操作即可；对于外引种源，除引种时的检查外，在使用前仍需进行严格检查，包括是否有杂菌斑点、条纹以及有无活虫或虫卵等，确认无误后，方可使用。
③无菌接种环境。由于真姬菇菌丝相对较弱，发展速度慢，占领料面需时较长，给杂菌的侵染造就了一定的机会，所以，作为料袋的解口，与空气直接相对，其所处空间环境的杂菌基数高低，就直接决定了菌袋的成功率，因此，创造一个接种的无菌环境是至关重要的，在实际生产中，发菌成功率很是理想，并且，由于人体不受接种箱的限制，工作效率大为提高，且没有药物对环境的污染，也就没有对人体的伤害，也就不存在药物残留等问题，值得推广应用。
发菌：一般在气温30℃条件下时，可予常温发菌。要求将空气湿度调控至75%左右，过低的湿度往往易使菌袋失水严重，导致影响出菇效果；但当气温高于30℃时，有条件时可采取水温空调等设备进行降温，或应采取将培养室顶部喷水降温、周围挂草苫喷水降温、加强晚间通风降温等措施。
单从这一点看，安排适宜的生产季节是至关重要的，一般宜在春季进行播种发菌，否则，进入夏季以后，持续的高温将严重影响和制约着菌袋的发菌成功率。适宜条件下，一般50天左右菌丝即可发满菌袋，完成发菌的菌袋，菌丝洁白，基料间隙完全被菌丝体充盈，菌袋硬度提高，手敲时发出类似空心木的声响，且富有弹性；打开袋口，菌香味较浓。
菌丝后熟培养：后熟培养，是真姬菇特有的生物特性，是不可或缺的过程之一。如在春季进行菌袋生产，待完成发菌时已进入高温时段，气温多在30℃左右，高者可达35℃左右，但由于长成的菌丝体具备较强的抗高温能力，所以，高温甚至是持续的高温条件下的后熟培养(也称二培菌),非但不影响菌丝活力，而且，只有经过该高温阶段的后熟培养，或者说，也只有后熟培养达到要求，菌袋(菌丝)才具备理想的结菇能力，所以，该阶段的高温条件及培养时间，是生产中的一个重要环节，应予高度重视。
后熟培养的操作较为简单，但是，期间不但时间长，而且客观因素影响较多。菌袋可在培养原地不动，利用通气等方式使室温升高至30~35℃,其它条件可同前期发菌阶段。期间要注意防治病虫危害；如空气过于干燥，菌袋失水严重，可适当阶段性地提高湿度至80%以上；通风量较前稍加大；管理方便时，可适当增加光线及温差刺激，以提高后熟效果，缩短培养期。
一般50天左右，菌丝体即可达生理成熟，其标志是：菌袋重量较播种期低约20%~30%、菌丝变为浅白黄色、基质由于失水而呈收缩状，已具备离壁条件，但由于失水速度极慢，基质周边与塑料膜贴合较紧，随着基质收缩，塑料膜呈凹凸不平的皱缩状，但二者结合紧密、手敲发出干段木的轻音，不闷不沉；无明显病虫害及潜在危险(虫卵等)。根据上述基本指标，即可判定该批菌袋已达后熟培养效果。
结束后熟培养后，如仍处于高温季节，离出菇的适宜时间还有一段时间，因此，只有将菌袋进行简单存放，或转越夏处理；存放条件以阴、凉、通风、闭光、无虫害为最佳，以山区及城市中的人防工事、地下室等为好，但大多数生产者无此条件；在林荫下搭遮雨荫棚并围以防虫网方式，主要是以闭光存放，大型果园下亦可；部分地区有连片种植佛手瓜、丝瓜、南瓜、葫芦的习惯，瓜架下用于菌袋存放的效果就很不错，但需注意闭光和控制湿度，尤其要注意防虫，总之，出菇前的菌袋存放以闭光、低温、通风、防虫等管理为主。（大相乡情）
